Методика определения объема клеток

Крамер и Штамм (Н. Cramer, D. Stamm, 1950) считают, что методика определения объема клеток настолько сложна и требует таких затрат времени, что она практически не может быть

использована для измерения большого количества клеток. Измерение же площади клеток и ядер дает большой выигрыш во времени, что имеет важное значение для практического применения цитометрии в ранней диагностике рака шейки матки.

Сначала мы измеряли перпендикулярный и параллельный по отношению к поверхности эпителия диаметры 100 клеток и ядер каждого гистологического среза и вычисляли их средний диаметр, после чего с помощью планиметрии производили измерения их площади.

Методика определения объема клеток

Некоторые авторы (Н. Cramer, D. Stamm, 1950; J. Reagan, JV1. Hamonic, 1956) предлагают измерять максимальный и минимальный диаметры клеток. Мы считали более объективным измерение перпендикулярного и параллельного диаметров клеток и ядер. Измерения диаметра клеток и ядер производились с помощью окуляр-микрометра при постоянной оптической системе микроскопа. До начала измерений при помощи объектива-микрометра устанавливали величину делений окуляр-микрометра для оптической системы микроскопа. Величина делений окуляр-микрометра для данной системы микроскопа составляла 3 (ок. 10Х, об. 40Х).

Для того чтобы провести сравнение величины клеток и ядер при внутриэпителиальном и инвазивном раке была измерена площадь 3000 клеток и ядер при внутриэпителиальном раке, 1000 клеток и ядер при инвазивном раке. Кроме измерений площади клеток и ядер, определялся ядерно-цитоплазменный индекс этих клеток.

С целью проведения более тщательного сравнения нами была измерена также площадь 1000 клеток и ядер нормального многослойного плоского эпителия и определен их ядерно-цитоплазменный индекс. При измерении наблюдалась значительная вариабильность величины и формы клеток и ядер. Такие изменения нередко яснее были видны в срезах внутриэпителиального рака средней зрелости, где наряду с малодифференцированными встречались и дифференцированные клетки. Очень часто наблюдалась значительная вариабильность величины и формы клеток в пределах одного поля зрения. Так, например, рядом с клеткой в 572 ji2 наблюдались клетки величиной в 7,06; 127; 254 и 346 ц2 и т. д.

При недифференцированном внутриэпителиальном раке вся толща эпителия состояла из незрелых клеток приблизительно одинаковой величины. Так, средняя арифметическая величина клеток и ядер базального слоя почти не отличалась от их величины в промежуточном и поверхностном слоях эпителия.

При дифференцированном внутриэпителиальном раке клетки промежуточного и поверхностного слоев эпителия обычно были больше клеток базального слоя. При внутриэпителиальном раке средней зрелости и зрелой формы они были в 1,5—2 раза больше клеток базального слоя. Характерным было наличие большого количества голых ядер при недифференцированных формах внутриэпителиального рака шейки матки.

Сравнивая кривые распределения площадей клеток, мы видим, что процентное содержание клеток определенной площади при инвазивном и внутриэпителиальном раке почти совпадает. Такая же картина наблюдается при рассмотрении графика кривой распределения площади ядер:

кривые, выражающие процентное содержание площадей ядер при инвазивном и внутриэпителиальном раке, также почти совпадают.

Из кривой распределения площадей ядер нормального эпителия видно, что подавляющее большинство ядер занимает значительно меньшую площадь, чем ядра клеток при внутриэпителиальном и инвазивном раке. Клетки базального слоя

Клетки базального слоя недифференцированного внутриэпителиального рака шейки матки при измерении оказывались часто меньше клеток базального слоя нормального многослойного плоского эпителия, однако в этих клетках наблюдался значительный сдвиг ядерно-цитоплазменного индекса вправо.

Масса ядра в злокачественных клетках, в особенности при недифференцированных формах рака, возрастает намного быстрее, чем цитоплазма, что ведет к значительному увеличению занимаемой ядром площади за счет цитоплазмы.

В связи с тем, что увеличение ядра за счет цитоплазмы имеет большое значение для диагностики внутриэпителиального рака, следует уделять особое внимание изучению в гистологических срезах процентного отношения между площадью ядра и цитоплазмы.

Мы сравнивали также ядерно-цитоплазменный индекс клеток внутриэпителиального рака с таким же индексом клеток нормального эпителия и инвазивного рака шейки матки.

В нормальном эпителии процент клеток, ядерно-цитоплазменный индекс которых выше 0,50, ничтожен. Так, например, процент клеток, ядро в которых занимает свыше 50% площади клеток, равнялся 1, причем эти клетки в основном находились в базальном слое. При внутриэпителиальном раке такие клетки составляли 80%, а при инвазивном — 86%. Важно отметить, что чем меньше дифференцировка клеток, тем большие площади в них занимает ядро. Так, нередко при недифференцированных -формах рака встречаются ядра, занимающие практически 100% всей площади клетки, т. е. так называемые голые ядра, или ядерные территории.

Из графического изображения кривой распределения ядерно-цитоплазменного индекса следует, что в нормальном эпителии для максимального количества клеток было характерно малое отношение площади ядра к площади клетки. При нормальном эпителии ядерно-цитоплазменный индекс у 39% клеток равнялся 0,2.

При внутриэпителиальном и инвазивном раке резко возрастало количество клеток, у которых процентное отношение площади ядра к площади цитоплазмы было выше 0,5 и заметно приближалось к 1. При внутриэпителиальном раке у 26%, а при инвазивном раке — у 24% клеток ядерно-цитоплазменный индекс составляет 0,8. В то же время ядерно-цитоплазменный индекс 16% клеток при внутриэпителиальном раке шейки матки равнялся 1. Процент голых ядер, или ядерных территорий, при инвазивном раке шейки матки равнялся 11%, что, очевидно, объясняется тем, что на данном этапе заболевания чаще встречаются более зрелые формы злокачественного новообразования, чем при внутриэпителиальном раке. Важно отметить, что кривые распределения ядерно-цитоплазменного индекса при внутриэпителиальном раке и инвазивной форме рака почти полностью совпадали.

Измерения ядерно-цитоплазменного индекса очень наглядны и характерны для злокачественных клеток, и поэтому имеют большое значение в диагностике внутриэпителиального рака шейки матки.

В заключение этой главы мы должны отметить, что цитомет-рические измерения (Каплан, 1962, 1963, 1964) подтвердили наши предыдущие выводы (Каплан, 1959, 1961), сделанные на основании клинических наблюдений и изучения гистологических ступенчатых и серийных срезов, о том, что внутриэпителиальный рак является самой ранней стадией развития злокачественного новообразования шейки матки.

Современное средство для роста ресниц и бровей Карепрост (careprost) - Сюда